296月

乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶组织化学染色法 – 实验方法

    胆碱酯酶

属于种特性酯酶,分为乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)和胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)两类。其活动中心是液量的单位。乙酰胆碱酯酶具有水解乙酰胆碱的功用,海外范围于神经纤维的粗面内质网、细胞形成物核、核周膜和触处前膜,胆碱能神经纤维内容高,它的有生气的是其自然和功用的要紧提及指示。,它也肿瘤诉讼顺序中神经纤维发作极性的光标。。乙酰胆碱酯酶亦存依赖朋友终板、肌细胞、红血球和肝内。胆碱酯酶次要范围于血浆、胰腺及涎腺。乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶二者的化学自然两样,检测底物种特性的酶,乙酰胆碱酯酶能快的地使凝结而下降乙酰胆碱腐烂,还可腐烂乙酰β-含甲基的胆碱,但不克不及腐烂苯甲酰基胆碱。同时,乙酰胆碱酯酶能被高浓度乙酰胆碱所减弱。可是胆碱酯酶则两样,乙酰胆碱浓度越高,胆碱酯酶能腐烂得越多。。详细不愿意如次:

    乙酰胆碱+H2O AChE 胆碱 乙酸酰基胆碱 H2O ChE 胆碱十羧酸水合氢

    亚铁氰化铜法:乙酰胆碱酯酶能将乙酰硫胆碱盐水解发作硫胆碱,硫胆碱使铁用氰化法处理复原为亚铁用氰化法处理,后者与铜水合氢结婚形成物铜沉淀和棕黄色。,以此颁发专业合格证书酶有生气的的在。假设四异丙烷基焦磷酰胺ISO-OMPA用于减弱非种特性的,则可独自显示乙酰胆碱酯酶。

    1)营养液的准备工作

    乙酰硫代胆碱以碘处理              5mg

    0.1mol/L乙酸缓冲答案(pH l 5)    6.5ml

    完整使溶解后,转移添加以下receive 接收:

    0.1mol/L  (2.94%)枸橼酸钠 0.5ml

    30mol/L  (0.75%)胆矾     lml

    5mol/L  (0.164%)铁氰化钾   lml

    全混合,receive 接收是艳丽的绿色,终极pH值 5.5―。运用前30分钟。 

    2)染料顺序:①古怪的

机构

冻部门后用丙酮或10%甲醛集中:显著地注意20―25分钟或经冷甲醛钙答案集中:显著地注意20分钟后冻部门;②使滴下水洗;③人孵育液中,室温2~6小时或摄氏37度 1~2小时;④使滴下水洗;⑤酒精脱水,二甲苯清晰度;醋精鱼胶封接。

    3)结实:乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶有生气的部位均显示成褐色(指甲花染料)沉淀。本法孵育液内各身分比例关系很要紧,如铜2+浓度太小,轻易范围幻影的。pH值为5~5.5最适宜条件,pH比6更轻易发作四散的。。

    4)对照试验:在孵育液中使隶属于4mmol/L四异丙烷基焦磷酰胺(ISO-OMPA)0.2ml减弱非种特性胆碱酯酶而显示乙酰胆碱酯酶(AchE);3×10的充满怨恨蔬菜炖羊肉硫酸盐-5mol/L替代使滴下水,率先,部门30分钟。,水洗后的气体,这两种酶被减弱和负的。。


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